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无缝克隆:让载体构建如此简单-资讯wiki版
来自 : 发布时间:2024-05-20
基因克隆或分子克隆,是应用酶学方法在体外将不同来源的DNA分子重新组装成杂合分子,并使之在适当的宿主细胞中进行扩增,形成大量子代DNA分子的过程。基因克隆方法经过几十年的发展,从传统的DNA连接酶介导的平粘末端克隆及TA克隆技术,到基于拓扑异构酶的TOPO克隆技术,再到基于DNA重组酶的Gateway重组和无缝克隆技术。相比之下,无缝克隆操作更加简单,灵活性更强,同时几乎不受序列的限制,一次可定向组装多个片段的dsDNA。无缝克隆的原理与传统的双酶切克隆类似,无缝克隆同样需要依赖于dsDNA的黏性末端进行互补配对,并利用DNA连接酶催化形成磷酸二酯键修复缺口。但是,无缝克隆并不使用\"内切酶”来制造黏性末端,而是通过\"外切酶”T5核酸外切酶来产生的,它能沿着5’→3’方向,降解dsDNA,从而产生黏性末端。我们可以通过PCR的方法,在外源拼接片段的两端加上线性化载体的序列,在T5外切酶作用下,就能产生几乎一致的黏性末端。相同的黏性......阅读全文 各位小伙伴,大家还记得当初进实验室的时候接触到的一个实验技能是什么呢?没错,是 PCR 扩增。小编曾经也是,看着自己亲自配比 PCR 克隆扩增的每个组分,亲眼看着琼脂糖凝胶在紫外透光台上发出的幽绿色的荧光,也是深深被迷住。但总不可能成天就对着这个邪魅的荧光发呆,对吧?看久了,她会爱上你的眼 载体构建实验常见问题大解析

大家是否在实验中经常遇到载体构建的各种问题,浪费大量的时间和精力,各种各样的问题让人头疼,海创科业小编作为科研老司机特意为各位科研君整理了载体构建实验常见问题及解决方法,希望能够帮助到大家。1.PCR载体构建大部分时候都要通过PCR的方法获取目的片段,扩增

BioTechniques:2015最受欢迎的技术文章

BioTechniques杂志日前评出了2015年最受欢迎的十篇技术文章,涵盖了对PCR、DNA提取、无细胞蛋白表达等常规技术的改良,以及CRISPR/Cas9、Hi-Plex、微图案化等新技术的应用。 1. Visual detection of isothermal nucleic aci

DNA的酶切与连接

实验方法原理 限制性内切酶能够特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异性位点上,并切割双链DNA。 DNA的酶切与连接——质粒DNA酶切

DNA的连接和酶切可用于:(1)利用限制性核酸内切酶切割DNA和利用DNA连接酶连接DNA是DNA重组过程中的关键步骤之一;(2)成功的酶切和有效的连接为后续的外源基因进入宿主细胞进行表达提供了有效的实验材料。实验方法原理限制性内切酶能够特异性地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附

小麦的\"癌症”克星找到了!袁隆平这样评价

小麦赤霉病,是世界范围内极具毁灭性且防治困难的真菌病害,有小麦\"癌症”之称。令人振奋地是,我国科学家在攻克小麦赤霉病上已迈出了关键一步。 山东农业大学农学院教授、山东省现代农业产业技术体系小麦创新团队首席专家孔令让及其团队从小麦近缘植物长穗偃麦草中克隆出抗赤霉病主效基因Fhb7,并成功将其转

清华大学Nature子刊:将Cas9应用于分子克隆

在4月21日的《自然实验手册》(Nature Protocols)杂志上,清华大学的朱听(Ting Zhu)研究员与博士生姜文君(Wenjun Jiang)撰文,详细介绍了利用一种叫做Cas9辅助靶向染色体片段(CATCH)的方法,靶向分离及克隆100kb微生物基因组序列的优化实验方案。 朱听

全球首例3D打印辅助颅底肿瘤切除术成功

3D打印\"克隆”出的患者颅底、肿瘤及周边血管网 3D打印出的患者肿瘤、血管网等相关组织 三维重建示意图 专家将3D打印组织与二维图片进行比照 日前,中南大学湘雅医院利用我国自主研发的E-3D数字化医疗三维设计系统,结合3D打印技术,成功将一名患者的复杂颅底肿瘤及周围组织等

推动材料学与生命科学发展 记2019北京市电子显微学年会

分析测试百科网讯 2019年12月17日,2019年度北京市电子显微学年会隆重举行。本次会议旨在推动北京及周边省市广大电子显微学的学术及技术水平,促进电子显微学工作者在材料科学、生命科学等领域的应用、发展和交流。会议共有200余人出席、参与。分析测试百科网作为支持媒体为您带来全程跟踪报道。年会签

科学仪器学科与技术进展的研究报告(九)

C)Nanopore sequencing (纳米孔测序方法) 采用完全不同的方法来鉴别DNA分子上的单个碱基,被称为纳米测序。以4种碱基间的物理性质差别为基础,将这种差别转变成为可以检测的信号,从而进行测序。此方法测序的是单个DNA分子,并不需要DNA的扩增。此方法目前还处于理论阶

刘雳宇:生物3D打印或将引发医学新革命

近年来,3D 打印在医疗行业的使用比例持续增长,产品也逐渐获得了监管机构的批准。这主要是因为医疗行业(尤其是修复性医学领域)的个性化定制需求显著,且鲜有标准的量化生产,而这恰好是3D打印技术的优势所在。 传统医疗常见的处理方式是根据病人的临床症状和体征,结合性别、年龄、家族疾病史、实验室和影像

\"十二五”科技发展规划

目 录 一、形势与需求 二、总体思路、发展目标和战略部署 (一)总体思路 (二)发展目标 (三)战略部署 三、加快实施国家科技重大专项 四、大力培育和发展战略性新兴产业 五、推进重点领域核心关键技术突破 (一)加强农业农村科技

数字PCR应用及前景

剖析|你想要知道的数字PCR应用及前景一. PCR的发展历史PCR技术自问世以来,在遗传病、病原体、癌基因等分子诊断领域和法医鉴定等方面发挥了巨大作用。代 PCR在进行扩增后通过凝胶电泳进行定性分析。随着生物分子荧光技术的发展,1992年实时荧光定量P

飞行时间质谱仪鉴定微生物

基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪(MALDI-TOF)指纹图谱法是一种微生物分类和鉴定的快速可靠的方法,可广泛应用于临床诊断、环境和分类研究或者食品加工质量控制中。BioTyperTM MALDI-TOF质谱仪指纹图谱法可使研究人员在几分钟内就可鉴定不明细菌、酵母菌和霉菌。微生物表达谱分析的

数字PCR应用(三)

Fluidigm公司于2006年底推出了基于集成流体通路(IFC)芯片的Bio-Mark™ 高通量基因剖析系统。 其创新在于集成液体通路技术:应用集成电路制造工艺(光刻)在硅片或石英玻璃上刻上许多微管和微腔体,经过不同的控制阀门控制溶液在其中的活动来完成生物样品的分液、混合、PCR扩增。图8. Bi

神通广大的数字PCR,到底有多厉害?

什么是数字PCR? 提起PCR,在生物及其相关行业内可谓无人不知无人不晓,半个世纪以来分子诊断的高速发展离不开分子生物学技术特别是PCR技术日新月异的进步。1983年由美国Mullis首先提出设想,1985年发明了聚合酶链反应,即简易DNA扩增法,标志着PCR技术的真正诞生。1999 年,美

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DNA组装与DNA合成技术并称为合成生物学的两大基础使能技术。在合成生物学和生物工程领域中,\"设计-构建-验证-学习(Design-Build-Test-Learn,DBTL)”的循环工程,精细的遗传元件无缝拼接以及重复DNA序列(如CRISPR和TALEN结合序列)串联分别需要迭代、无痕和序列

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发布于 : 2024-05-20 阅读()